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ELISA檢測試劑盒試驗需恪守的中心原理
發布時間:2021-08-05瀏覽:116次

  ELISA檢測試劑盒試驗需恪守的中心原理

  ,的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。

  ELISA檢測試劑盒可以用于:(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。

  ELISA檢測試劑盒實驗中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標好號,-20°C或-80°C保存。運輸是用干冰。

  把ELISA檢測試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說,操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+T結合。然后洗去不需要的非目標(即不表達CD4的),留下磁珠-抗體-復合物。將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。最后,只需將上清轉移就可以進行下游研究了。

  ELISA檢測試劑盒試驗有必要恪守以下3個中心原理:

  (1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并堅持其免疫學活性;

  (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構成酶結合物,而此種酶結合物仍能堅持其免疫學和酶學活性;

  (3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可依據參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,ELISA檢測試劑盒可依據已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規范曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

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