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常見的酶標板分為哪幾類?
發布時間:2021-03-12瀏覽:466次

  常見的酶標板分為哪幾類?

  酶標板在酶聯免疫吸附試驗中, 參與免疫學反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時間等條件起著關鍵作用。

  此外,作為載體的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面對抗原、抗體或抗原抗體復合物的吸附也起著重要作用。

  根據酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同可以將酶標板分為以下幾類:

  1、高結合力酶標板:

  酶標板經表面處理后蛋白結合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產生非特異性反應??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。

  2、中結合力酶標板:

  酶標板經表面疏水鍵被動與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。

  由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

  3、氨基化酶標板:

  酶標板經表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。

  由于其表面的親水特性和可通過其它交聯劑共價結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結合;

  此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯劑中任何功能基團發生作用。

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